科创中国

生物与新医药技术

本发明涉及一种利用单层培养技术制备和分离定型内胚层细胞的方法。本发明还公开了适用于制备定型内胚层细胞的培养基，所述培养基含有Neurobasal培养基、DMEM/F12培养基、N-2添加物、B-27添加物、牛血清白蛋白、单-二羟丙硫醇、活化素A。本发明的方法简单高效，可将哺乳动物(优选非人哺乳动物)胚胎干细胞向定型内胚层分化的效率大大提高。

本发明的主要优点在于： (1)本发明首次揭示一种利用单层培养技术诱导胚胎干细胞高效分化为定型内胚层细胞以及通过流式细胞术富集的新方法，该方法具有诱导条件简单明确，重复性高；诱导效率高的优点。 (2)本发明的方法富集到的内胚层细胞纯度较高，显微镜下可见该细胞为典型上皮样细胞；很少有其它胚层细胞的污染，特别是有效减少了胚外内胚层细胞的产生。 (3)本发明的方法得到的小鼠定型内胚层细胞可用于后续分化为各种内胚层来源器官的前体细胞类型，如胎肝细胞(Afp+)、胰腺前体细胞(Pdx1+)等。 本发明的主要优点在于： (1)找到了一种非常适合于诱导胚胎干细胞分化为定型内胚层细胞的培养基；并且，提供了基于所述培养基添加Noggin或bFGF而诱导定型内胚层细胞分化为胎肝细胞或胰腺前体细胞的培养基。 (2)提供了一种采用单层培养技术制备定型内胚层细胞占优势的细胞群方法，所述方法诱导定型内胚层细胞的效率高，产生的细胞群中基本不存在胚外内胚层细胞；并且，产生的细胞群中造血中胚层、胚外内胚层(VE)、滋养外胚层、神经外胚层细胞基本维持在胚胎干细胞本底的表达水平，没有大量产生。

项目所在单位致力于生命科学前沿基础研究与应用基础研究，依托多学科重点实验室，开展基因调控、RNA与表观遗传学，蛋白质科学，细胞信号转导，细胞与干细胞生物学，癌症和其他重大疾病机理等领域的研究。